柏金絲病

描述 1.病原概述 病原型別：原生動物(protistan parasites) 病原環境：海水 學名：Perkinsus olseni 病名(及俗名)： 最早發現者： ＯＩＥ狀況：表列(Listed) 病原摘要： 全世界之軟體動物(mollusks)因perkinsus 之感染造成嚴重死亡(severe mortalities )及經濟損失(significant economic losses) (Villalba et al 2004)。病原可於離開宿主(host)數天至幾星期，因其有一厚細胞壁(thick cell wall)，但於淡水中不穩定，在淡水中常溫下存活時間少於10分鐘，6ppm之氯作用30分鐘同樣可殺死病原(Goggin 1995)，其生活史中之任一階段都可感染宿主。 人畜共通：無(No) 病原分類 2.病原分類：原生動物中之Perkinsus 屬 　命名沿革：重要的幾次命名歷史文獻 疾病特性 　感染組織及器官：感染路徑、好發組織器官 所有器官之結締組織及血細胞(connective tissue of all organs, haemocytes)。 疾病型態及流行病學：急性或慢性型態、器官傳播分佈情形 可被感染之軟體動物相當多如，蛤類(clams)含 Anadara trapezia, Austrovenus stutchburyi, Tapes decussatus, Tapes philippinarum, Pitar rostrata。牡蠣( oysters)： Crassostrea gigas, Crassostrea ariakensis, Crassostrea sikame。真珠牡蠣 (pearl oysters)： Pinctada margaritifera, Pinctada martensii; abalone - Haliotis rubra, Haliotis laevigata, Haliotis scalaris, Haliotis cyclobates (2, 16, 18, 24, 28)。其它雙殼貝 (bivalve) 及腹足綱軟體動物( gastropod) 亦有可能被感染寄生 (Hamaguchi et al 1998)。 臨床症狀及病理學： 為一種致命性之感染(infection is lethal )，但死亡往往是感染後1-2年才發生(OIE 2006) 肉眼上常可見水樣組織(watery tissue)、消化腺蒼白、有些宿主之鰓上會有結節(nodules in gills)。但這些並非感染 Perkinsus olseni 之專一病變。 組織病理學 活或剛死亡之軟體動物(freshly dead mulluscs)為佳，樣本可以Davidson’s 固定液固定，組織中應含有消化腺體及鰓。於在結締組織中可見局部多發病變同時含有P. olseni ，伴隨血細胞浸潤(haemocyte infiltration)及吞噬情形，於蛤(clam)切片中病原常被一厚的嗜酸性物質(thick layer of eosiniophilic material)所包圍(encapsulated)，病原大小約 5-15um蟲體為球狀，蟲體具具有一大空泡及偏於一邊之核，perkinsus olseni於H&E 染色下呈藍色。此方法於感染中度到嚴重時容易被觀察到，但無法區別是何種perkinsus 所引起(OIE 2006)。 病原致病性意義：實際魚場及田間發病、抗藥性等情形

臨床及組織病理學:如上述 可使用smear 病材經Giemsa staining 以400X 觀察可見到病原(5-15um)其具有一大空泡及偏於一邊之核(with a large vacuole and eccentric nucleus)，此方法無法區別何種species。 病原培養：whole body burden assay (Almeida et al 1999) ：將病材切成2-5mm大，放入fluid thioglyocollate culture medium(含抗生素)，於黑暗中培養4-7天後，1,500g 離心10分鐘去上清，加入2M NaoH(20ml/g 組織) 於60℃下培養2-6小時，1500g 離心10分鐘後去上清，所留下之pellet 以蒸餾水洗3次後，pellet 並溶於 Logol’s 溶液。其結果蟲體大小會變大由5-15um 到50-70um 其壁會染成藍色或帶有點藍之黑色(bluish-black)(圖1)(Ray 1966)。 其它亦可使用 Ray’s fluid thyoglycollate culture (OIE 2006) 分子生物學 DNA之抽取：可使用一般市售之kit 如Qiagen等，依Robledo 2000 所設計之引子對分別為5'-ATG-CTA-TGG-TTG-GTT-GCG-GAC-C-3' 及5'-GTA-GCA-AGC-CGT-AGA-ACA-GC-3' ，其產物大小為690bp。 反應條件為94℃ 4 分鐘，之後35個循環 92℃ 1分鐘、60℃ 1分鐘(每一循環加1秒)、72℃ 1分鐘(每一循環加2秒)，最後 72℃ 7分鐘。 Abollo 2006 研究中所使用之引子並配合內核酸酵素(endonucleases)，可診斷柏金絲症同時可確立是何種(Perkinsus species)引起。 其所使用之引子對為引用Casas et al 2002 分別為ITS-85 5-ccg ctt tgt ttg ga/c tcc c- 3，及 IITS-750 5-aca tca ggc ctt cta atg atg- 3 。 其反應條件為 94℃ 5 分鐘， 35個循環 94℃ 45秒、55℃ 45秒、72℃ 1分鐘，最後72℃ 10分鐘。 產物配合(Hinf I and Rsa I)可區分是何種所引起。

詳細討論如何治療、療效情形 化學治療上cyclohexamide, pyrimethamine, deferoxamine (DFO) and 2, 2-bipyridyl 等於體外試驗中 可抑制 P. olseni and 而DFO 可體外及宿主內皆可抑制 P. olseni (13) Bacitracin 也許可有效抑制P. marinus 及 P. olseni.( Faisal et al 1999) Ps. 上述所有藥物皆不可使用，因國內法規中之水產動物用藥使用規範中未列入。

詳細討論疫苗發展現況及飼養管理控制現況 目前無疫苗可供使用，選具有抵抗性之品種，目前有可抗P. marinus 之品種但此品種無法抵抗P.olseni之感染(Ragone et al. 2003)。

Almeida M, Berthe F, Thebault A, Dinis MT. Whole clam culture as a quantitative diagnostic procedure of Perkinsus atlanticus (Apicomplexa, Perkinsea) in clams Ruditapes decussatus. Aquaculture, 177: 325-332, 1999. Faisal M, La Peyre JF, Elsayed EE. Bacitracin inhibits the oyster pathogen Perkinsus marinus in vitro and in vivo. J Aquat Anim Health 11: 130-138, 1999. Goggin CL, Lester RJG, Perkinsus, a protistan parasite of abalone in Australia: a review. Aust J Mar Freshwater Res. 46, 639-646, 1995. Hamaguchi M, Suzuki N, Usuki H, Ishioka H. Perkinsus protozoan infection in short-necked clam Tapes (=Ruditapes) philippinarum in Japan. Fish Pathol., 33: 473-480, 1998. OIE (2006) Manual of Diagnostic Tests for Aquatic Animals.World Organisation for Animal Health (http://www.oie.int). Ragone Calvo LM, Calvo G.W. Burreson E .M. Dual disease resistance in a selectively bred eastern oyster, Crassostrea virginica, strain tested in Chesapeake Bay. Aquaculture, 220: 69-87, 2003. Ray SM. A review of the culture method of detecting Dermocystidium marinum with suggested modifications and precautions. Proc. Natl. Shellfish Assoc. 54: 55-69, 1966. Robledo JAF, Coss CA, Vasta G.R. Characterization of the ribosomal RNA locus of Perkinsus atlanticus and development of a polymerase chain reaction-based diagnostic assay. J. Parastol. 86: 972-978, 2000. Villalba A, Reece KS, Orda’ s MC, Casas SM, Figueras A. Perkinsosis in molluscs: A review. Aquat Liv Res. 17: 411–32, 2004.

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